Emergence of clonal complex 5 (CC5) methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolates susceptible to trimethoprim-sulfamethoxazole in a Brazilian hospital

In this study, genotyping techniques including staphylococcal chromosomal cassette mec (SCCmec) typing, pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), multilocus sequence typing (MLST) and restriction-modification tests were used to compare the molecular characteristics of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) isolates recovered at two times within a 10-year interval (1998 and 2008) from a tertiary Brazilian hospital. In addition, the antimicrobial susceptibility profiles were analyzed. All 48 MRSA isolates from 1998 and 85.7% from 2008 (48/56 isolates) displayed multidrug-resistance phenotypes and SCCmec III. All but one of the 13 representative SCCmec III isolates belonged to CC8 and had PFGE patterns similar to that of the BMB9393 strain (Brazilian epidemic clone of MRSA; BEC). In 2008, we found an increased susceptibility to rifampicin and chloramphenicol among the SCCmec III isolates. In addition, we detected the entrance of diverse international MRSA lineages susceptible to trimethoprim-sulfamethoxazole (SXT), almost all belonging to CC5. These non-SCCmec III isolates were related to the USA 300 (ST8-SCCmec IV; PFGE-type B), USA 800 (ST5-SCCmec IV; subtype D1), USA 100 (ST5-SCCmec II; subtype D2), and EMRSA-3/Cordobes (ST5-SCCmec I, type C) clones. To the best of our knowledge, this is the first report of the emergence of isolates genetically related to the EMRSA-3/Cordobes clone in southeast Brazil. In this regard, these isolates were the most common non-SCCmec III MRSA in our institution, accounting for 8.9% of all isolates recovered in 2008. Thus, despite the supremacy of BEC isolates in our country, significant changes may occur in local MRSA epidemiology, with possible consequences for the rationality of MRSA empiric therapy.

Características seminais, corpóreas e anatômicas do aparelho reprodutor de reprodutores da raça canchim aos 14 e 48 meses de idade. / Anatomical, corporal and seminal characteristics of the reproductive system of canchim breed reproductors at ages from 14 to 48 months / Características seminales, corpóreas y anatómicas del aparato reproductor de reproductores de la raza canchim a los 14 y 48 meses de edad

Foram utilizados 20 touros da raça Canchim em inatividade sexual, divididos em grupo 1 (G1), constituído de 10 animais com 14 meses de idade e grupo 2 (G2), com 10 animais de 48 meses de idade. A proposta desse estudo foi investigar as características dos ejaculados e das mensurações anatômicas do trato reprodutivo da raça Canchim. Os parâmetros obtidos foram: peso médio de 445,5 e 706,02 kg; circunferência escrotal de 31,80 e 36,25 cm e índice de massa corpórea de 270,33 e 346,73 kg/m2 para o G1 e G2, respectivamente, com diferenças significativas (p < 0,05) entre eles. Realizaram-se quatro colheitas de sêmen por touro por meio de eletroejaculação, com intervalos de 14 dias, verificando-se diferença significativa (p < 0,05) para os defeitos espermáticos totais, entre a primeira (5,48) e a terceira colheitas (1,08), no G2. Os resultados sugerem que o desenvolvimento do aparelho reprodutivo e a espermatogênese estão presentes aos 14 meses de idade.

Twenty bulls of the Canchin breed in sexual inactivity were divided in group 1(G1) with ten animals at the age of 14 months old and group 2 (G2) with ten animals at the age of 48 months old. The purpose of this study was to investigate the characteristics of the ejaculators and anatomic measurements of reproductive tract in Canchim breed. The parameters obtained were the average weight from 445.5 to 706.02 kg, scrotal circumference from 31.8 to 36.25 cm and Corporal Mass Index from 270.33 to 346.73 kg/m² for G1 and G2 respectively with a significant difference (p<0.05). Four semen collections per bull were made with electro ejaculation with intervals of 14 days, and it showed significant difference (p<0.05) for the total spermatic flaws, between the first (5.48) and the third collect (1.08) in G2. These results suggest that the development of the reproductive tract and the spermatogenesis are present at the age of 14 months old.

Fueron utilizados 20 toros de la raza Canchim en inactividad sexual, divididos en grupos:Grupo 1 (G1) con 10 animales, con edades de 14 meses y el grupo 2 (G2) con 10 animales, con edades de 48 meses, teniendo como objetivo verificar la adaptación al clima tropical, por medio de las características de los eyaculados y medidas anatómicas del aparato reproductivo. Los parámetros obtenidos fueron peso medio de 445,5 y 706,02 kg; circunferencia escrotal de 31,80 y 36,25 cm e índice de masa corpórea de 270,33 y 346,73 kg/m² para el G1 y G2, respectivamente, con diferencias significativas (p<0,05). Fueron realizadas cuatro colectas de semen por toro, con intervalo de 14 días, por medio de electroeyaculación verificando diferencias significativas (p<0,05) para los defectos espermáticos totales entre la primera (5,48) y la tercera colecta (1,08) en el G2. Los resultados sugieren que el desarrollo del aparato reproductor y la espermatogénesis están presentes a los 14 meses de edad.

Secreção de interferon-tau em embriões bovinos produzidos in vitro frescos e congelados / Interferon tau secretion in cattle embryos in vitro fertilized before and after cryopreservation

Avaliou-se a interferência da criopreservação sobre a secreção de interferon-tau (IFN-t) por embriões bovinos produzidos in vitro. Usaram-se dois grupos de tratamentos: I) constituído por embriões não criopreservados (fresco) e II) embriões criopreservados. Os embriões, após atingirem a fase de blastocisto (fresco ou imediatamente após o descongelamento dos criopreservados), continuaram a ser cultivados individualmente por mais sete dias. Do meio de cultivo em que se mantiveram os blastocistos retiraram-se alíquotas com três e sete dias do início do cultivo, para a avaliação da secreção de IFN-t pelos embriões cultivados. Os embriões congelados secretaram menos IFN-t do que aqueles não criopreservados(P<0,05), e com sete dias houve maior secreção do interferon do que com três dias (P<0,05). A criopreservação prejudicou a produção de IFN-t pelo trofoblasto e pode comprometer o reconhecimento materno da gestação e o desenvolvimento do embrião pós-descongelamento.

Secreção de interferon-tau em embriões bovinos produzidos in vitro frescos e congelados / Interferon tau secretion in cattle embryos in vitro fertilized before and after cryopreservation

Avaliou-se a interferência da criopreservação sobre a secreção de interferon-tau (IFN-t) por embriões bovinos produzidos in vitro. Usaram-se dois grupos de tratamentos: I) constituído por embriões não criopreservados (fresco) e II) embriões criopreservados. Os embriões, após atingirem a fase de blastocisto (fresco ou imediatamente após o descongelamento dos criopreservados), continuaram a ser cultivados individualmente por mais sete dias. Do meio de cultivo em que se mantiveram os blastocistos retiraram-se alíquotas com três e sete dias do início do cultivo, para a avaliação da secreção de IFN-t pelos embriões cultivados. Os embriões congelados secretaram menos IFN-t do que aqueles não criopreservados (P<0,05), e com sete dias houve maior secreção do interferon do que com três dias (P<0,05). A criopreservação prejudicou a produção de IFN-t pelo trofoblasto e pode comprometer o reconhecimento materno da gestação e o desenvolvimento do embrião pós-descongelamento.

The effect of cryopreservation in IFN-tau, from bovine embryos produced in vitro was evaluated. Two treated groups (G1= fresh bovine embryos, n=59 and G2= freezed embryos, n=84) were used to study the effect of cryopreservation on IFN-tau secretion. After reaching the blastocyst phase, the embryos were kept on individual culture for additional period of 7 days. On days 3 and 7 after the beginning of embryos cultivation, samples of the media culture were taken for IFN-tau secretion titration. Oocysts taken from follicles ranging from 3 to 5mm in diameter were obtained from ovaries of females at slaughterhouse. The embryos were frozen, after being dehydrated with ethylene glycol (1.8m), conditioned on 0.5ml palletes and frozen. Frozen embryos secreted lower IFN-tau than fresh embryos (P<0.05). At day 7 it was registered higher IFN-tau secretion from trophoblast than at day 3 (P<0.05). The increasing of IFN-tau secretion was observed when the blastocyst began to longed and it was directly related to the embryos development. The synthesis of IFN-tau is related to the capability of development of the blastocyst. Cryopreservation is a method that affects the maternal recognition of pregnancy and the post-freezing embryo development.

A continuous fluorescent assay for the determination of plasma and tissue angiotensin I-converting enzyme activity

A continuous assay using internally quenched fluorescent peptides with the general sequence Abz-peptidyl-(Dnp)P-OH (Abz = ortho-aminobenzoic acid; Dnp = 2,4-dinitrophenyl) was optimized for the measurement of angiotensin I-converting enzyme (ACE) in human plasma and rat tissues. Abz-FRK(Dnp)P-OH, which was cleaved at the Arg-Lys bond by ACE, was used for the enzyme evaluation in human plasma. Enzymatic activity was monitored by continuous recording of the fluorescence (lambdaex = 320 nm and lambdaem = 420 nm) at 37°C, in 0.1 M Tris-HCl buffer, pH 7.0, with 50 mM NaCl and 10 æM ZnCl2. The assays can be performed directly in the cuvette of the fluorimeter and the hydrolysis followed for 5 to 10 min. ACE measurements in the plasma of 80 healthy patients with Hip-His-Leu and with Abz-FRK(Dnp)P-OH correlated closely (r = 0.90, P < 0.001). The specificity of the assay was demonstrated by the complete inhibition of hydrolysis by 0.5 æM lisinopril or captopril. Abz-FRK(Dnp)P-OH cleavage by ACE was monitored in rat lung, kidney, heart, and liver homogenates in the presence of a cocktail of inhibitors containing trans-epoxy-succinyl-L-leucylamido-(4-guanido)-butene, pepstatin, phenyl-methylsulfonyl fluoride, N-tosyl-L-phenylalanyl-chloromethyl ketone, and N-tosyl-lysyl-chloromethyl ketone to prevent undesirable hydrolysis. ACE activity in lung, heart and kidney homogenates, but not in liver homogenates, was completely abolished by 0.5 æM lisinopril or captopril. The advantages of the method are the procedural simplicity and the high sensitivity providing a rapid assay for ACE determinations.

IgA secretora total e específica no colostro e leite de mães da cidade do Natal-Rio Grande do Norte, Brasil / Total and specific IgA in colostrum and milk of mothers of Natal-Rio Grande do Norte, Brasil

PURPOSE: To determine the concentration of total secretory IgA and evaluate the repertoire of IgA antibodies to enteropathogenic Escherichia coli and Shigella flexneri antigens in colostrums and milk from mothers in Natal, RN. METHODS: The sample was constituted by 22 healthy clinically women whose babies were born at public hospital in Natal, RN. To determine total secretory IgA a radial immunedifusion tecnique (Mancini et al, 1965), was employed and to detect specific antibodies, immuneenzimatic assays, ELISA was used. RESULTS: The median values of total secretory IgA concentration presented individual variations with high levels in colostrums samples, decreasing during lactation, it was observed a p < 0.001 among the samples from the first day of lactation, to the thirtieth for total IgA concentration. All the donators present in colostrum and milk specific antibodies to Escherichia coli enteropathogenic (EPEC) and Shigella flexneri with titles higer in colostrum. There was parallel and directional pattern between total IgA and IgA anti-EPEC and Shegella flexneri, during period. CONCLUSION: The concentrations of total SIgA and specific antibodies to enteropathogenic Escherichia coli and Shigella flexneri in colostrums and milk in our study do not differ from others accomplished among populations with the same social and econimic features, stressing the importance of human milk as a protector agent against pathogens.

Desenvolvimento pós-fecundaçäo de oócitos bovinos pré-maturados em fluido folicular / Post-fertilization development of bovine oocytes pre-matured in follicular fluid

Estudou-se o efeito da pré-maturaçäo em fluido folicular bovino (FFb) sobre o potencial de desenvolvimento de ovócitos bovinos imaturos. Complexo cumulus- ovócitos (CCO) e FFb foram obtidos de ovários coletados em matadouro. O FFb foi inativado e os CCOs imaturos distribuídos em quatro tratamentos: (T1) 70 por cento de FFb em Talp Hepes, (T2) 100 por cento de FFb, (T3) 100 por cento de Talp Hepes, e (T4) controle. Em T1, T2 e T3 os CCOs foram pré - maturados por cinco horas a 37ºC em ar e posteriormente maturados in vitro. Em T4 a maturaçäo ocorreu logo após a aspiraçäo. Depois de fecundados in vitro, os ovócitos foram co-cultivados com células do cumulus por 10 dias. Avaliaram-se as taxas de clivagem, de produçäo de blastocistos no sétimo e oitavo dias pós- fecundaçäo (PF), de produçäo total e de blastocistos eclodidos no oitavo e nono dias PF. Calcularam-se as taxas de blastocistos no sétimo e oitavo dia e de blastocistos eclodidos em funçäo do total de blastocistos produzidos. As taxas de clivagem, de produçäo total e de blastocistos eclodidos näo diferiram entre os tratamentos (P>0,05), entretanto a produçäo de blastocistos no sétimo dia foi menor nos tratamentos com FFb e Talp Hepes (P<0,05). Concluiu-se que FFb e Talp Hepes na pré-maturaçäo por cinco horas atrasam o desenvolvimento embrionário sem comprometer a taxa de produçäo total de embriöes ou sua viabilidade.

Taurina no desenvolvimento de embriöes bovinos fecundados in vitro / Taurine on the development of in vitro fertilized bovine embryos

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes concentraçöes de taurina no desenvolvimento de embriöes bovinos fecundados in vitro em meio de cultivo com diferentes fontes de soro. No experimento 1, zigotos (n=440) fecundados in vitro foram distribuídos aleatoriamente nos tratamentos com 0, 3, 7 ou 14 mM de taurina em meio de cultivo acrescido de 10 por cento de soro fetal bovino (SFB) e 3g/l de albumina sérica bovina (BSA). No experimento 2, os zigotos (n=940) foram divididos nos tratamentos com 0, 3 ou 14 mM de taurina em meio acrescido de 10 por cento de SFB ou 3g/l de BSA. No experimento 3, os zigotos (n=191) foram divididos nos tratamentos com 0 ou 3 mM de taurina em meio de cultivo sem fonte de soro, porém adicionado de 3 g/l de álcool polivinil. Nos experimentos 1 e 2 näo se observou diferença (P>0,05) na taxa de clivagem, na produçäo de blastocistos e no número de células entre as concentraçöes de taurina avaliadas. No experimento 3 encontraram-se maior (P<0,05) taxa de clivagem (68,5 por cento vs. 16,9 por cento) e produçäo de blastocistos (8,3 por cento vs. 0 por cento) na presença de taurina. O cultivo de zigotos em meio adicionado de SFB produziu maior (P<0,01) taxa de blastocistos no sétimo (25,6 por cento vs. 6,7 por cento) e oitavo (30,8 por cento vs. 13,9 por cento) dia pós-fecundaçäo e número de células/blastocistos (104,8± 2,63 vs. 84,7± 3,86) do que no cultivo com BSA, apesar de menor (P<0,01) taxa de clivagem (58,1 por cento vs. 71,3 por cento). Conclui-se que o efeito benéfico da taurina no desenvolvimento embrionário somente é observado na ausência de SFB e BSA. O SFB produz menor taxa de clivagem mas melhora o desenvolvimento embrionário após as primeiras divisöes celulares

Taurina no desenvolvimento de embriões bovinos fecundados in vitro

The effect of different taurine concentrations on bovine embryo development in medium supplemented with different serum sources was studied. In the first experiment, in vitro fertilized zygotes (n=440) were divided into treatments with 0, 3, 7 or 14 mM of taurine in culture medium supplemented with 10% of fetal calf serum (FCS) and 3g/l of bovine serum albumin (BSA). In the second experiment, zygotes (n=940) were divided into treatments with 0, 3 or 14 mM of taurine in cultured medium supplemented with 10% of FCS or 3g/l of BSA. In the third experiment, zygotes (n=191) were divided into treatments with 0 or 3 mM of taurine in culture medium without serum source, even so supplemented with 3g/l of polyvinyl alcohol. In the first and second experiments no differences (P>0.05) in cleavage rate, blastocyst production and cells number among the concentrations of taurine were observed. In the third experiment, taurine increased (P 0.05) cleavage rate (68.5% vs. 16.9%) and blastocysts production (8.3% vs. 0%). The culture of zygotes in medium supplemented with FCS produced more (P 0.01) blastocyst in the seventh (25.6% vs. 6.7%) and eighth (30.8% vs. 13.9%) day post-fertilization and total cells number/blastocysts (104.8± 2.63 vs. 84.7± 3.86) than in medium with BSA, despite lower (P 0.01) cleavage rate (58.1% vs. 71.3%). In conclusion, taurine only has a beneficial effect in the embryo development in culture medium in the absence of FCS and BSA. Fetal calf serum decreases cleavage rate, however, it improves the embryo development after the early cleavage.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes concentrações de taurina no desenvolvimento de embriões bovinos fecundados in vitro em meio de cultivo com diferentes fontes de soro. No experimento 1, zigotos (n=440) fecundados in vitro foram distribuídos aleatoriamente nos tratamentos com 0, 3, 7 ou 14 mM de taurina em meio de cultivo acrescido de 10% de soro fetal bovino (SFB) e 3g/l de albumina sérica bovina (BSA). No experimento 2, os zigotos (n=940) foram divididos nos tratamentos com 0, 3 ou 14 mM de taurina em meio acrescido de 10% de SFB ou 3g/l de BSA. No experimento 3, os zigotos (n=191) foram divididos nos tratamentos com 0 ou 3 mM de taurina em meio de cultivo sem fonte de soro, porém adicionado de 3 g/l de álcool polivinil. Nos experimentos 1 e 2 não se observou diferença (P>0,05) na taxa de clivagem, na produção de blastocistos e no número de células entre as concentrações de taurina avaliadas. No experimento 3 encontraram-se maior (P 0,05) taxa de clivagem (68,5% vs. 16,9%) e produção de blastocistos (8,3% vs. 0%) na presença de taurina. O cultivo de zigotos em meio adicionado de SFB produziu maior (P 0,01) taxa de blastocistos no sétimo (25,6% vs. 6,7%) e oitavo (30,8% vs. 13,9%) dia pós-fecundação e número de células/blastocistos (104,8± 2,63 vs. 84,7± 3,86) do que no cultivo com BSA, apesar de menor (P 0,01) taxa de clivagem (58,1% vs. 71,3%). Conclui-se que o efeito benéfico da taurina no desenvolvimento embrionário somente é observado na ausência de SFB e BSA. O SFB produz menor taxa de clivagem mas melhora o desenvolvimento embrionário após as primeiras divisões celulares.